隨著醫(yī)學的飛速發(fā)展,各種高大上的新檢查和新項目大量涌現(xiàn);但在實驗室檢查中,有些不起眼的“老”檢查卻不可或缺、歷久彌新——比如大便隱血。
大便隱血除了可以對有明顯胃腸道出血病史的患者進行監(jiān)測外,在胃腸道腫瘤篩查預警、抗凝劑使用過程中的出血監(jiān)測等方面都有著非常重要的意義。因為它的靈敏、快捷、廉價,在臨床上應用廣泛。
不少醫(yī)生對“大便隱血”還留有課本上“檢測前三日禁食動物血液內臟”的印象,擔心飲食因素會引起大便隱血檢測的不準確,實驗室也經(jīng)常收到類似的臨床咨詢;其實原因還是在于以往大便隱血多用“聯(lián)鄰甲苯胺”法(即化學法)檢測,影響因素頗多。然而隨著大便隱血的方法不斷改進,現(xiàn)在其檢測方法主要為免疫膠體金法,基本取代了以往的化學法。
接下來,說說大便隱血的檢測
以往的“化學法”多為鄰聯(lián)甲苯胺法,其原理是利用血紅蛋白中的亞鐵血紅素的過氧化物酶活性,催化過氧化氫放出新生態(tài)氧,把受體鄰聯(lián)甲苯胺氧化成聯(lián)甲偶氮苯而顯色。顯色的深淺反映了Hb的多少,即出血量的大小。該法可檢出1~5mg/L的Hb,消化道5~10ml出血即為陽性。由其檢測原理即可知:該方法缺乏很好特異性和準確性,易出現(xiàn)假陽性反應,任何有類似氧化物酶活性的物質都可影響此實驗:外源性動物食品如含有Hb、肌紅蛋白,其含鐵血紅素的作用可使試驗陽性;大量生食富含葉綠素蔬菜,其中含有活性的植物過氧化物酶也可催化過氧化氫分解出現(xiàn)陽性反應。故目前多數(shù)實驗室已不用化學法作為大便隱血的檢測方法,僅作為補充實驗。
膠體金法則是用免疫法檢測人血紅蛋白或轉鐵蛋白抗原。在檢驗試紙條的檢測線包被有抗人血紅蛋白(或轉鐵蛋白)抗體,質控線包被有羊抗鼠IgG抗體,在檢測試紙條加樣的一端固定有另一抗人血紅蛋白(或轉鐵蛋白)單克隆抗體標記的膠體金顆粒。經(jīng)收集處理的標本與膠體金顆粒混合后,如存在人血紅蛋白(或轉鐵蛋白)時,樣品有Hb會與和膠體金上的抗體結合,可在檢測線上出現(xiàn)紅色色帶。它只特異地針對人Hb和Tf的抗原表位,基本排除了飲食及藥物因素的干擾;且具有很好的靈敏度,一般Hb為0.2 ug/ml就可得到陽性結果,Tf最低40ug/ml即可檢出。
膠體金法中的“血紅蛋白”和“轉鐵蛋白”的應用各有側重,互為補充。血紅蛋白用來檢測隱血“天經(jīng)地義”,可檢出下消化道任何部位的出血;轉鐵蛋白主要存在于血漿中,在健康人的糞便中幾乎不存在,而在消化道出血時的糞便中大量存在。因上消化道的出血經(jīng)消化酶作用后,其紅細胞基質盡被消化,血紅蛋白抗原性通常消失,不再有免疫反應,而轉鐵蛋白穩(wěn)定性明顯高于血紅蛋白,此時可以作為有力的補充檢出陳舊的上消化道出血。用兩種免疫學方法同時檢測兩種抗原,能夠起到互補作用,對初步鑒別消化道出血部位,也具有一定臨床意義。
檢測方法一多,在臨床上就難免會出現(xiàn)“不一致”的情況,常見的如下。
化學法與免疫法(膠體金)不一致
化學法靈敏性低于膠體金法,故極少量的出血會造成鄰聯(lián)甲苯胺法(陰性)膠體金法(陽性)的結果,此時糞便外觀通常無明顯異常。
但如果血紅蛋白在消化道停留時間過長,或受細菌分解等因素而降解,其與膠體金試紙上包被的抗體的相應抗原受到破壞時就會出現(xiàn)假陰性,若此時出血量在鄰聯(lián)甲苯胺法檢測限上就會出現(xiàn)鄰聯(lián)甲苯胺法陽性而血紅蛋白法陰性的結果。另外當出血量大于膠體金法檢測范圍,隨著血紅蛋白含量增加,抗原抗體復合物反而減少,產(chǎn)生后帶效應,免疫膠體金法出現(xiàn)假陰性,上述兩種情況大便外觀通常會有明顯改變,常為典型的柏油樣便,只需將糞便溶液調配成一定濃度后檢測,免疫膠體金法可獲陽性結果。
臨床上最多見的還是由于飲食的影響(動物血、內臟、葉綠素),使得化學法呈現(xiàn)假陽性,而免疫法陰性的情況,大便外觀無明顯異常,此時應以免疫法判斷為準。
血紅蛋白法和轉鐵蛋白不一致
常見的是Hb-,Tf+。常見于陳舊的上消化道出血,Hb抗原性經(jīng)由消化消失,Tf較為穩(wěn)定而呈現(xiàn)陽性結果;另外比較常見的是一些腹瀉患者的大便,由于可能伴隨血漿蛋白滲出,而使得轉鐵蛋白呈陽性反應,一般僅為“弱陽性”。
比較少見的情況是Hb+,Tf-。如果患者有明確的消化道出血病史,潛血出現(xiàn)了OB+,TF-的結果,考慮此次試驗所取標本中出血較為微量,由于Hb的檢測下限是0.2 ug/ml,而TF為40ug/ml,敏感度不如Hb,不足以檢測出更為微量的出血,建議重新取樣,盡量取外觀顏色異常的部位,并持續(xù)觀察。另外還要結合患者本身的血漿Tf水平,如果血漿水平很低,那么也有可能使得出血大便中的Tf濃度太低而檢測不出。
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